1試劑和儀器
1．1儀器
L－7000型液相色譜儀(日本日立公司) ，配二極管陣列檢測(cè)器
1．2試劑
甲醇(HPLC級(jí))β－苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)
1．3色譜條件
色 譜 柱:ultimateXB－C18柱(4．6×250mm，5μm，120) ;柱溫:25°C;檢測(cè)波長(zhǎng):210nm;流 動(dòng) 相:甲 醇+水=55+45;流 速: 1．0ml/min;進(jìn)樣體積:20μl。
1．4實(shí)驗(yàn)步驟
1．4．1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
準(zhǔn)確稱取β－苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)25mg，以流動(dòng)相(甲醇+水=55+45)溶解，定容至25ml容量瓶中，此溶液為1．0mg/ml標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。臨用前用流動(dòng)相稀釋。
1．4．2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
用流動(dòng)相稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液成0．5μg/ml、1．0μg/ml、5．0μg/ml、10ml、50μg/ml標(biāo)準(zhǔn)系列，參照色譜條件，將色譜儀調(diào)至*狀態(tài)，進(jìn)樣20μl，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
1．4．3樣品處理準(zhǔn)確移取10ml米酒樣品于50ml容量瓶中，用流動(dòng)相定容，搖勻，經(jīng)0．45μm濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣20μl。
2結(jié)果與討論
2．1流動(dòng)相條件的選擇
本文比較了甲醇與水的不同流動(dòng)相比例(甲 醇+水=55+45;甲醇+水=50+50;甲醇+水=60+40)條件下的實(shí)驗(yàn)效果，在其他色譜條件不變的情況下，當(dāng)甲醇與水的流動(dòng)相比例為55∶45時(shí)，樣品中的被測(cè)物峰能與溶劑峰、雜質(zhì)峰達(dá)到有效分離，且峰形對(duì)稱性好，因此，本實(shí)驗(yàn)選用甲醇+水=55+45作為流動(dòng)相。
2．2檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇
本實(shí)驗(yàn)利用二極管陣列檢測(cè)器對(duì)β－苯乙醇在190nm～300nm之間進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，β－苯乙醇在210nm處有zui大吸收波長(zhǎng)，考慮到本實(shí)驗(yàn)采用甲醇作為溶劑定容處理樣品，甲醇的紫外吸收波長(zhǎng)在190nm～200nm，對(duì)本實(shí)驗(yàn)干擾小，故選用有較強(qiáng)吸收的210nm作為本方法的檢測(cè)波長(zhǎng)。
2．3標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢測(cè)限
以β－苯乙醇濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線 性 回 歸 方 程 為Y=57008X+1823，相 關(guān)系 數(shù)r為0．9999，表明在0．5μg/ml～50μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。以3倍噪聲信號(hào)比計(jì)算zui低檢出濃度為0．02μg/ml。
2．4準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn)
在米酒樣品中分別加入1．0μg/ml、5．0μg/ml、25．0μg/ml低、中、高三個(gè)濃度的β－苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述實(shí)驗(yàn)條件分別進(jìn)行6次測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。
、
2．5樣品測(cè)定
使用本方法對(duì)市場(chǎng)銷售米酒進(jìn)行測(cè)定，其中樣品色譜圖見(jiàn)圖3，樣品加標(biāo)色譜圖見(jiàn)圖4。
3結(jié)果
本文建立了運(yùn)用液相色譜測(cè)定米酒中β－苯乙醇的方法，流動(dòng)相為 甲 醇+水(55+45) ;色 譜 柱為ultimateXB－C18柱(4．6×250mm，5μm，120) ;柱 溫:25°C;流 速1ml/min，zui適吸收波長(zhǎng)210nm。此方法具有處理簡(jiǎn)單、快速、定量準(zhǔn)確、回收率高和重復(fù)性好的特點(diǎn)，能夠滿足樣品檢測(cè)需要。
在線咨詢