[目的]
規(guī)范Waters液相色譜系統(tǒng)的使用和維護(hù)。
[范圍]
本規(guī)程適用于Waters液相色譜系統(tǒng)的使用和維護(hù)。
[職責(zé)]
質(zhì)檢室儀器分析員負(fù)責(zé)Waters液相色譜系統(tǒng)的日常使用和維護(hù)。
[系統(tǒng)組成]
本系統(tǒng)由Waters 600E多溶劑輸送系統(tǒng)（有梯度控制器的高壓輸液泵）、Waters在線脫氣機(jī)、Rheodyne 7725i手動(dòng)進(jìn)樣閥、Waters 2487雙通道紫外檢測器、Millennium32色譜工作站/電腦等組成，另外還包括打印機(jī)、斷電保護(hù)器和通風(fēng)柜等輔助設(shè)備。
[開機(jī)程序]
1. 狀態(tài)檢查：
1）檢查儀器外觀是否完好
2）檢查各種線纜連接是否穩(wěn)固，外表有無損傷痕跡
3）確認(rèn)環(huán)境溫度在15至35℃之間
4）相對濕度在20%至80%之間
3. 接線要求：
1）液相色譜主機(jī)電源
2）連接電腦主機(jī)和顯示器電源
4. 開機(jī)步驟：
1）打開電腦電源，進(jìn)入windows系統(tǒng)
2）打開液相色譜電源，儀器開始自檢（約5～6min），待儀器操作面板上出現(xiàn)“Idle”字樣表示自檢成功，儀器進(jìn)入待命狀態(tài)。
[測試步驟]
1. 進(jìn)入軟件
1）雙擊電腦桌面上的Empower快捷圖標(biāo)，出現(xiàn)Empower登陸窗口。輸入用戶名與密碼，默認(rèn)賬號(hào)為“system”，密碼為“manager”，點(diǎn)擊“OK”進(jìn)入Empower工作站。
2）選擇“運(yùn)行樣品”界面，點(diǎn)擊“確定”,然后選擇待選定的操作項(xiàng)目以及色譜系統(tǒng)
2 編輯儀器方法和方法組
1）在“運(yùn)行樣品”界面中，監(jiān)視區(qū)單擊方法組編輯向?qū)А?/p>
2）選擇新建按鈕，彈出儀器方法編輯器。
3）通用編輯頁面中，可設(shè)置單次輸送體積，查看脫氣選項(xiàng)，確認(rèn)設(shè)置正確，選擇等度或者梯度，總流量以及流動(dòng)相配比等選項(xiàng)。
4）單擊2475圖標(biāo)，彈出2475編輯界面，在波長模式中選擇相應(yīng)的波長模式，單波長或者雙波長，輸入所需的波長，選擇相應(yīng)的采樣速率，一般為2點(diǎn)/秒。
5）點(diǎn)擊“文件”，選擇“另存為”，輸入儀器方法名稱，點(diǎn)擊“保存”，退出。
6）在被選項(xiàng)中選擇所需的儀器方法名稱，點(diǎn)擊“下一步”。
7）在下拉菜單中選擇所需的處理方法和報(bào)告方法（如果沒有合適的方法選擇"無處理"、"無報(bào)告"），點(diǎn)擊“下一步”。
8）輸入方法組名稱，單擊"完成"。
3 運(yùn)行方法進(jìn)樣
1）在“運(yùn)行樣品”界面中，選擇相應(yīng)的儀器方法，點(diǎn)擊“監(jiān)視器”，在監(jiān)視窗口監(jiān)視基線至系統(tǒng)平衡，停止系統(tǒng)監(jiān)視狀態(tài)，點(diǎn)擊停止按鈕。單進(jìn)樣，點(diǎn)擊參數(shù)編輯快捷方式進(jìn)入定義單進(jìn)樣參數(shù)編輯界面，輸入樣品名、功能、方法組等參數(shù)。點(diǎn)擊“進(jìn)樣”。
2）建立樣品組和樣品組方法
選擇“樣品組”任務(wù)欄，進(jìn)入樣品列表，依次設(shè)置以下內(nèi)容：樣品瓶號(hào)、樣品名稱、樣品類型、進(jìn)樣次數(shù)、進(jìn)樣體積、運(yùn)行時(shí)間、方法組、、下一進(jìn)樣延遲時(shí)間等，點(diǎn)擊“運(yùn)行”，方法組開始進(jìn)樣。
[更換溶劑]
1.打開600E泵后，轉(zhuǎn)動(dòng)進(jìn)口集合管閥手柄（以下簡稱手柄）至RUN位置；
2 .將一塑料燒杯放在參照閥出口管下以收集分流的溶劑，向右打開參照閥（斷開柱和進(jìn)樣器）；
3. 按［Direct］鍵使其顯示直接控制屏幕，設(shè)流速為1ml/min（梯度配比閥在0ml/min時(shí)不工作）；
4. 選擇欲使用的某一溶劑通道，設(shè)其比例為100%，其它為0%；
5. 將輸液管從原有溶劑瓶中取出，放入一干凈的空瓶中；
6. 逆時(shí)鐘轉(zhuǎn)動(dòng)手柄至DRAW位置，用啟動(dòng)注射器從進(jìn)口集合管閥的接口抽出約2ml溶劑；
7. 再將輸液管放入新溶劑瓶內(nèi)，繼續(xù)抽吸直到新溶劑出來并無氣泡為止；
8. 轉(zhuǎn)動(dòng)手柄至RUN位置，將啟動(dòng)注射器取下并排掉筒內(nèi)的溶劑。
9. 重復(fù)5.2.2.4.~5.2.2.8.直至所有即將使用的溶劑更換完畢。
[排氣泡]
1. 打開參照閥，換流動(dòng)相為100%超純水，設(shè)流速為10ml/min（注意：確認(rèn)參照閥是打開的，否則可能損壞安裝好的柱）；
2. 轉(zhuǎn)動(dòng)進(jìn)口集合管閥手柄至DRAW位置，用啟動(dòng)注射器抽出約10ml水；
3. 順時(shí)鐘轉(zhuǎn)動(dòng)手柄至INJ位置，緩慢用力使水通過泵頭從參照閥出口管排出（注意不要將氣泡注入泵中）；
4. 按［Stop flow］屏幕鍵停泵，關(guān)上參照閥。
5. 如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下泵出口管，用塑料管連接至塑料燒杯中，設(shè)流速為10ml/min，沖洗2~5min（或更長時(shí)間）后停泵，重新接上柱。
[平衡系統(tǒng)（分兩種情況進(jìn)行）]
1. 等度模式
1.1. 每次以0.1ml/min的增量加大流速至1ml/min，以超純水沖洗系統(tǒng)10min。
1.2. 檢查管路連接、柱接口及泵頭處是否漏液，如漏液應(yīng)予以排除。
1.3. 觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動(dòng)應(yīng)在平均值的5~10%以內(nèi)。如超出此范圍，可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，重復(fù)5.2.3.下的步驟。
1.4. 壓力波動(dòng)平穩(wěn)后，換檢驗(yàn)方法規(guī)定的流動(dòng)相比例沖洗系統(tǒng)。在檢查基線穩(wěn)定性前，讓zui少5~6倍柱體積的流動(dòng)相通過系統(tǒng)。
1.5. 在QuickSet窗口下的Instrument Method檔內(nèi)選擇所需的儀器方法，按「Monitor」（此后泵由軟件控制），觀察基線和壓力變化。如果沖洗至基線漂 移<10-3Au/min，噪聲為10-4Au數(shù)量級(jí)，且壓力平穩(wěn)時(shí)，可認(rèn)為系統(tǒng)已達(dá)到平衡狀態(tài)，可以進(jìn)樣。5.3.1.6. 按「Abort」圖標(biāo)（左上第五個(gè)），停止監(jiān)視基線。
2. 梯度模式
2.1. 按檢驗(yàn)方法規(guī)定的條件沖洗平衡系統(tǒng)，并注意壓力波動(dòng)變化和排氣泡。
2.2. 在進(jìn)樣前運(yùn)行1~2次空白梯度。
[進(jìn)樣]
1. 在QuickSet窗口內(nèi)左下部選
2. 用針頭濾器過濾試樣溶液（注射液可不必過濾），用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量。如按部分裝液法，用微量注射器定容進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50%，并要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同；5.4.2.2. 如按*裝液法，用定量環(huán)定容進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的3倍（5~10倍準(zhǔn)確性更佳）。
3. 按
4. 將進(jìn)樣閥手柄轉(zhuǎn)動(dòng)至Load位置，將注射器針*插入進(jìn)樣閥入口中，平穩(wěn)地注入試樣溶液，除另有規(guī)定外，讓注射器留在進(jìn)樣閥上，將進(jìn)樣閥手柄快速轉(zhuǎn)動(dòng)至Inject位置，系統(tǒng)將自動(dòng)運(yùn)行，采集數(shù)據(jù)并記錄圖譜。
5. 讓進(jìn)樣閥手柄保持在Inject位置，到下次進(jìn)樣前1~2min切換回Load位置，將注射器從進(jìn)樣閥中拔出。
6. 先用水再用試樣溶液清洗注射器后，按以上程序繼續(xù)進(jìn)樣，直至完成。
[數(shù)據(jù)處理（外標(biāo)法）和打印]
1. 右擊系統(tǒng)主界面下的『Browse Project』圖標(biāo)，選擇相應(yīng)的項(xiàng)目，按「OK」進(jìn)入Project窗口，選
2. 建立處理方法 選擇一個(gè)待積分的標(biāo)準(zhǔn)，右擊后選“Review”進(jìn)入Review窗口。按「Processing Method Wizard」圖標(biāo)（左邊*個(gè)）進(jìn)入New Processing Method向?qū)Т翱冢础窸K」。
2.1. 劃入一個(gè)感興趣的zui窄的峰，按「Next>」；
2.2. 劃入一段包含噪聲的基線，按「Next>」；
2.3. 劃入一段要積分的區(qū)間，按「Next>」；
2.4. 根據(jù)情況選擇zui小峰面積和zui小峰高，按「Next>」、「Next>」；
2.5. 在Name檔內(nèi)輸入各組分峰的名稱，按「Next>」、「Next>」；
2.6. 在Method Name檔內(nèi)填寫方法名稱，按「Finish」。退出Review窗口。
3. 修改標(biāo)準(zhǔn) 選中所有標(biāo)準(zhǔn)，右擊后選“Alter Sample”進(jìn)入Alter Sample窗口。
3.1. 在Sample Type檔內(nèi)將Unknown改成Standard；
3.2. 按「Amount」圖標(biāo)（左上第六個(gè)）進(jìn)入Component Editor窗口；
3.3. 按「Copy from Process Method」圖標(biāo)（左上第五個(gè)），選擇剛建立的處理方法，按「Open」，在Value和Units檔內(nèi)分別輸入標(biāo)準(zhǔn)所含各組分的數(shù)值和單位，完成后按「OK」回到Alter Sample窗口；
3.4. 按「Save」圖標(biāo)存盤，退出Alter Sample窗口。
4. 積分 先選中所有標(biāo)準(zhǔn)，再選中所有未知樣品，右擊后選“Process”進(jìn)入Background Processing & Reporting窗口，選Use specified processing methods，在右邊檔內(nèi)選擇剛建立的處理方法，按「OK」。
5. 打印 在Project窗口下選
5.1. 選中要打印的標(biāo)準(zhǔn)/樣品，右擊后選“Preview”進(jìn)入Open Report Method窗口，選合適的打印方法，按「OK」進(jìn)入Report Publisher (Preview)窗口，預(yù)覽打印的結(jié)果。按打印(Print)圖標(biāo)（左上第二個(gè)）即可打印結(jié)果。
5.2. 按「Close」可進(jìn)入Report Publisher窗口對報(bào)告方法進(jìn)行修改，完成后按「Print」圖標(biāo)（右數(shù)第二個(gè)）即可打印結(jié)果。
6. 數(shù)據(jù)處理完成后，關(guān)閉所有窗口，在主界面下按「Logout」退出系統(tǒng)，關(guān)閉Millennium32軟件，再依次關(guān)閉電腦主機(jī)、顯示器、打印機(jī)。
7. 清洗系統(tǒng)和關(guān)機(jī)
7.1. 數(shù)據(jù)采集完畢后，關(guān)閉檢測器，繼續(xù)以工作流動(dòng)相沖洗10min后，換水沖洗。
[關(guān)機(jī)程序]
1）關(guān)機(jī)前應(yīng)用適當(dāng)比例的有機(jī)相和水相沖洗柱子
2）關(guān)閉儀器電源
3）關(guān)閉電腦電源
[維護(hù)保養(yǎng)程序]
1）定期清潔，保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵。
2）使用完畢后用防塵布遮蓋儀器如連續(xù)3個(gè)月未使用儀器，將儀器通電1個(gè)小時(shí)后再關(guān)閉，除掉儀器內(nèi)部濕氣。
［注意事項(xiàng)］
1.使用儀器前必須仔細(xì)閱讀儀器使用說明書。
2.按儀器使用要求準(zhǔn)備測試樣品，不得測試不符合要求的樣品。
3.小心操作，防止樣品污染和腐蝕儀器。
4.有機(jī)溶劑有害健康，各溶劑瓶口應(yīng)封嚴(yán)。
5.儀器使用后按操作程序，切斷電源，清理擦拭儀器，蓋上儀器罩。
6.在操作時(shí)發(fā)生故障應(yīng)停止使用，并及時(shí)通知管理人員。
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